解决方案丨从柠檬黄到亮蓝，探秘食品中11种合成着色剂的测定方法！
食品合成着色剂，也称为合成食用色素，是通过化学合成工艺生产的，用于给食品着色的物质。这些着色剂能增强食品的色彩，提高食品的感官吸引力，使食品更加诱人。合成食用色素的使用受到严格的法规和标准的约束。在国内，食品添加剂的使用需遵循《食品安全法》及相关国家标准，欧洲杯官方网站依据GB 5009.35-2023《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》，采用WAX混合型弱阴离子固相萃取柱，整理归纳了全套的解决方案，适用于多基质的检测应用。
1仪器与耗材
固相萃取：Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪
氮气吹干装置：Auto EVA80高通量全自动平行浓缩仪
高效液相色谱：（HPLC）Agilent 1260
固相萃取柱：RayCure WAX ，150mg/6mL，30支/盒（RC-204-72823N）
2 样品制备
2.1 标准工作曲线配置
分别取浓度为50μg/mL的混合标准中间液4μL、10μL、20μL、40μL、100μL于2mL进样瓶中，用水稀释至1mL，摇匀，得到标准系列工作液。浓度分别为0.2ug/mL、0.5ug/ml、1.0ug/ml、2.0ug/ml、5.0ug/ml。
2.2 样品提取
准确称取试样2g（精确至0.001g），置于50 mL具塞离心管中，先加入适量水（2 mL-5 mL），50 ℃水浴加热混匀样品，加入25mL乙醇氨水溶液，涡旋1min，50℃超声或振摇（速率≥250r/min）提取20min，8000r/min离心5 min，取上清液置于50mL容量瓶中，每次加入约5 mL-10 mL乙醇氨水溶液重复提取操作至上清液无明显颜色，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL，即得提取液。准确吸取提取液10mL，50℃氮气浓缩至3mL左右，分2-3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，作为待净化液。
2.3 固相萃取净化条件
(1) 活化：依次用6mL甲醇和6mL水活化固相萃取柱
(2) 上样：活化后立即将提取后的待净化液以2s-3s/滴的流速加载固相萃取柱上
(3) 淋洗：依次用6mL2%甲酸水溶液和6mL甲醇淋洗合成着色剂专用固相萃取柱，弃去淋洗液
(4) 吹干：抽干柱体
(5) 洗脱：用6mL2%-5%氨化甲醇溶液洗脱，分两次加入，每次3mL，流速低于2s-3s/滴，收集洗脱液
(6) 氮吹：于50℃氮气浓缩至近干
(7) 复溶：准确加入2mLpH=9的乙酸铵溶液溶解。溶液用0.45μm水系针筒过滤器过滤，弃去2-5滴初滤液，收集后续滤液作为待测液
图1 食品中合成着色剂检测
固相萃取法Fotector Plus仪器方法设置
图2 Auto EVA仪器氮吹参数
3 液相检测条件
3.1色谱柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm，或同等性能色谱柱
3.2 进样量：10μL
3.3 柱温：30 ℃
3.4 二极管阵列检测器波长范围：400nm-800nm，检测波长：
415nm(柠檬黄、喹黄)
520nm(新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红和赤藓红)
610nm(靛蓝、亮蓝)
3.5 参考洗脱梯度见表1，其中流动相A为20mmol/L乙酸铵溶液，流动相B为甲醇
表1 参考洗脱梯度表
3.6 谱图
图3为415nm，520nm，610nm波长下，11种合成着色剂标准品（1μg/mL）谱图
图3
4方法可行性验证
为了验证该方法的回收率，本实验向冰红茶饮料样品（2g）中加入上述11种食品中合成着色剂标准品（200μL，50μg/mL），进行加标回收验证。测试结果如下表所示。11种食品中合成着色剂的回收率在71.96-98.94%之间，RSD 值在0.39-6.15%之间。
表2 冰红茶饮料中11种合成着色剂的
加标回收率及RSD值（%）
图4为415nm，520nm，610nm波长下，冰红茶饮料样品加标（1μg/mL）谱图
图4
5 实验小Tips
5.1 样品提取过程中，注意提取液乙醇氨水尽量临用现配。
5.2 小柱使用前活化后让柱体保持湿润，上样后调整流出速度，使其保持在2-3秒/滴，过快不利于目标化合物保留。
5.3 氮吹、复溶、过膜。经净化后，洗脱液需要50℃水浴氮吹，氮吹过程中需注意控制氮吹时间，以防样品被完全吹干，否则复溶会相对困难。复溶液需要调pH为9，复溶液pH会影响靛蓝的稳定性和赤藓红的回收率。滤膜的选用也需谨慎，在使用前请考察滤膜是否吸附色素。
6仪器优势特点
01
经样品处理后的提取液利用 Fotector Plus 全自动固相萃取仪进行净化，告别样品量多和人为操作的烦恼。
02
净化完的洗脱液通过Auto EVA全自动平行浓缩仪对其进行浓缩，此过程无需样品转移，便可直接对其进行浓缩，其设计大大减少了样品损失。
