黄精中多种禁用农药及相关化学品残留的测定
黄精是百合科、黄精属植物，以根茎入药，可用于脾胃虚弱、体倦乏力、口干食少、肺虚燥咳、精血不足、内热消渴等症及治疗肺结核、癣菌病等。黄精含有多种营养成分，包括糖分、脂肪、蛋白质、淀粉、胡萝卜素、维生素等。随着人们对黄精营养价值的认识，黄精需求日渐增多，黄精中的农药残留也越来越受关注。本文参考2020版《中国药典》2341通则农药残留量测定法新增第五法《药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法》中的快速样品处理法（QuEChERS），建立了黄精中33种禁用农药及其单体残留量的测定方法，保证了黄精药用的安全性。
黄精试样用1%的冰醋酸水溶液进行浸泡使其充分浸湿，再用乙腈进行提取，以无水硫酸镁、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶、硅胶、石墨化碳黑的混合粉末进行分散式固相萃取净化，最后用welcome欧洲杯 EVA 80全自动氮吹仪对提取液进行浓缩。实验结果表明，除了杀虫脒之外，其他化合物的回收率均在60-120%之间，RSD在10%以内。该方法简单、快速、高效，且准确度和精密度均符合农药多残留的检测要求，可用于黄精中多农残的快速筛查和测定。
仪器与耗材
1.仪器
welcome欧洲杯Auto EVA 80 高通量全自动平行浓缩仪
Agilent 1290+6470高效液相色谱/质谱联用仪
Agilent 8890+7000D气相色谱/质谱联用仪
涡旋仪；离心机
2.试剂
乙腈（HPLC）、冰醋酸（AR）、超纯水；
GC-MS/MS法33种农药混合标准储备液：0.2/0.4/1.0 μg/mL；
LC-MS/MS法30种农药混合标准储备液：0.2/0.4/1.0 μg/mL；
GC-MS/MS法内标使用液：磷酸三苯酯 0.1 μg/mL
3.耗材
货号 | 产品描述 | 规格 |
RC-50070 | 萃取盐包：6g无水硫酸镁+1.5g醋酸钠（含50 mL离心管） | 50个/盒 |
RC-15030 | 15mL净化管：300mgC18+300mgPSA +90mgGCB+300mgSilica +900mgMgSO4 | 50个/盒 |
RC-5003C | 50mL陶瓷均质子 | 100个/瓶 |
样品前处理
精密称取黄精试样3g，加入15ml 1%冰醋酸溶液，涡旋混匀并震荡2min，静置30min，精密加入乙腈15ml，涡旋混匀并震荡5min，加入RayCure提取盐包和一颗陶瓷均质子，立即摇散，震荡1min后置于冰水浴中10min。4000r/min离心5min，取上清液9ml置于RayCure分散式固相萃取净化管中，涡旋使充分混匀，并震荡5min使净化完全，将净化管4000r/min离心5min，精密吸取上清液5ml转移至20ml玻璃试管中，使用 EVA 80氮吹仪浓缩至约0.4ml后取出，加乙腈稀释定容至1ml，LC-MS/MS加0.3ml水，GC-MS/MS加0.3ml磷酸三苯酯，涡旋混匀，过滤膜上机。
图1 Auto EVA 80 氮吹浓缩条件
检测条件
1.气相色谱质谱联用条件
采用MRM多反应监测模式进行定量分析。GC-MS/MS检测条件：进样口温度280 ℃，不分流进样，隔垫吹扫流量为3 mL/min，进样量1.0 μL；载气为高纯He气，恒流模式，流速为1.0 mL/min；电子轰击电离源（EI），离子源温度280 ℃，传输线温度280 ℃。色谱柱为Agilent CP9151 VF-1701MS (30 m x 250 μm x 0.25 μm )。
GC 程序升温程序：初始温度40℃，保持1 min；以40 ℃/min速度升温至120 ℃；以5 ℃/min升温至240 ℃，以12 ℃/min升温至300℃，保持4 min。
2.MRM参数
表-1 各农药的保留时间、监测离子对及碰撞电压
3.气质联用色谱图
图-2 33种禁用农药标准品的总离子流图（1 μg/mL）
4.高效液相色谱质谱联用条件
5.MRM参数
表-2 各农药的保留时间、监测离子对及碰撞电压
6.液质联用色谱图
图-3 30种禁用农药标准品的总离子流图（1 μg/mL）
样品测试
1.提取液净化
黄精基质较为复杂，含有糖分、脂肪、蛋白质和色素等成分，共萃取物较多。一方面基质残留会使得目标化合物的响应被抑制或者增强，而农药是容易受到基质影响的分析物；另一方面杂质会在色谱柱中积聚，也会缩短色谱柱的寿命。本实验采用RayCure分散式固相萃取净化管对提取液进行净化，提高色谱柱的寿命。该净化柱的填料为复合填料，由无水硫酸镁、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶、硅胶、石墨化碳黑混合。其中，无水MgSO4起到吸收水分的作用，以保证上气质前样品不含水分；C18可以去除样品基质中的脂肪和脂类等非极性干扰物；PSA可以去除糖类、脂肪酸、有机酸和酚类等干扰物质；GCB可以去除色素和甾醇。
2.基质加标回收实验
在黄精样品中添加浓度为40 μg/kg的33种农药(GC-MS/MS)和20 μg/kg的30种农药(LC-MS/MS)进行加标回收验证，使用上述样品前处理方法，平均回收率和RSD结果如下所示。
表-3 GC-MS/MS法33种化合物的平均回收率
和相对标准偏差(n=3)
表-4 LC-MS/MS法30种化合物的平均回收率
和相对标准偏差(n=3)
总结
1.样品在加入提取盐包后要立即摇散，否则容易结块。使用陶瓷均质子可以防止萃取盐结块，并能够均匀地分散样品，提高萃取效率，降低人力成本。
2 加入提取盐包后会放出大量的热，所以振荡后需尽快放入冰水浴中冷却，或者用预冷的乙腈，防止对热不稳定化合物造成影响。
3在氮吹浓缩过程中，温度不能超过40°C，氮气压力不能过大，浓缩时注意不能吹干，否则将导致部分化合物损失。
解决方案优势
实验采用welcome欧洲杯EVA 80全自动平行浓缩仪，可以实现80个样品同时浓缩，提高浓缩效率的同时，仪器可实现针随液面的高度下降，加快浓缩速度，节约氮气成本；人性化的可视化窗口设计可以看到样品浓缩剩余体积，避免吹干。
RayCure QuEChERS提取盐包和净化管采用进口高品质填料，严格按照药典标准进行等量封装，即拿即用，提取和净化效果优异，可以节约宝贵的人力资源和时间成本。
